一.取材:
組織塊小于1立方毫米
二.固定:
2.5%戊二醛,磷酸緩沖液配制固定2小時或更長時間。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%鋨酸固定液固定 2-3小時
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三.脫水:
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱內進行
100%丙酮 室溫 15-20分三次
四.包埋:
純丙酮+包埋液(2:1)室溫 3-4小時
純丙酮+包埋液(1:2)室溫 過夜
純包埋液 37度 2-3小時
五.固化:
37度烘箱內 過夜
45度烘箱內 12小時
60度烘箱內 48小時
六.超薄切片機切片70 nm
七.3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
八.透射電鏡JEOL JEM-1230(80KV)觀察。拍片。