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儀器簡介
- Beckman Coulter 公司MoFlo XDP 是高速分選型流式細胞儀，可以對樣本中特定的細胞進行定量（所占百分比、單細胞表面相對蛋白表達強度等），并對目標細胞進行分選純化（據標記情況可達99%以上的純度）。分選純化后的細胞活性高，細胞狀態好，可進行下游的細胞培養、功能測定、動物試驗和RNA/DNA/蛋白抽提等工作。
- MoFlo XDP 可對樣本中任意含量的目標細胞進行分析和分選（國內應用的下限目前低至十萬分之一的目標細胞），樣本單次獲取和保存的細胞量可高達10 億個。分選速度為70000 細胞/秒時仍保持高純度，硬件丟棄（Hard Abort 或 Electronic Abort）的比例低于5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。
儀器配置
- 噴嘴大小：70 μm，100μm
- 樣本上樣管適配器：離心管（0.5 ml/1.5ml/15ml/50ml），普通流式管
- 分選細胞收集管適配器：離心管（0.5 ml/1.5ml/15ml/50ml），6-1536 孔板，玻片
- 可同時進行四路分選、6-1536 孔板單細胞或任意制定細胞數分選、玻片任意矩陣分選
- 提供上樣時溫度控制裝置和氣溶膠防護裝置
- 激光系統/濾光片系統/對應的熒光染料（熒光蛋白）-見下表：
| 激光器 |
激光功率 |
通道 |
接收波長及帶寬 |
對應熒光染料/熒光蛋白 |
| 488 |
200mW,
可調 |
FSC |
N/A |
N/A |
| SSC |
N/A |
N/A |
| FL1 |
529/28 |
GFP、YFP、FITC、Alexa488 |
| FL2 |
580/23 |
PE |
| FL3 |
628/32 |
PI |
| FL4 |
670/30 |
PerCP、PerCP-Cy5 、PE-Cy5、PE-Cy5.5等，PMT確認故障，濾光片可以調換至FL3，因此不影響PE-Cy5、PE-Cy5.5等的檢測，但不能與628/32濾光片同時使用。 |
| FL5 |
785/62 |
PE-Cy7 |
| 355 |
100mW， |
FL6 |
457/50 |
DAPI、Hoechst33342、Hoechst33258 |
| FL7 |
457/50 |
Hoechst33342 |
| 561/638 |
200mW/
60mW |
FL8 |
785/62 |
APC-Cy7 |
| FL9 |
625/26 |
RFP、tdTomato、mcherry |
| FL10 |
575/25 |
EB等，PMT故障 |
| FL11 |
670/30 |
APC |
適用范圍
- 最佳檢測和分選細胞大小范圍：0.2—30 μm
- 細胞種類：
- 組織分離細胞
- 細胞系
- 細菌
- 酵母
- 血液
- 骨髓
- 體液細胞
- 等等......
儀器分選示意圖
主要應用：
- 基于細胞表型的分析分選
- 基于細胞漿或細胞核（胞內）蛋白的分析分選
- 基于？DNA 倍體的細胞周期分析分選
- 基于代謝（如？Side Population ，SP）細胞的分選
- 常見實驗方法：熒光蛋白轉染、腫瘤干細胞和其它干細胞、細胞免疫功能、細胞周期、細胞凋亡、細胞信號傳導、細胞器研究等。
- 有標記物的幾乎任何細胞的分析分選都可以進行。
- 分選示例：
 
樣品準備指南
- 實驗準備階段：目標細胞的MARKER, 對應的抗體和熒光選擇，了解需要檢測的目標細胞的特異性標記和對應的抗體，選擇商品化的抗體(熒光標記或未標記,合適的熒光素或二抗)；選擇合適的熒光和抗體對照。
- 樣本處理：必須是單細胞懸液。
- 外周血和骨髓收集時加抗凝劑即可進行染色,可溶解紅細胞或直接進行檢測和分選。
- 培養細胞需要消化, 過濾和洗滌至少一次后才能染色。
- 組織樣本必須通過研磨成單細胞并過濾后才能進行染色。
- 熒光染色：按照106有效細胞與1ug 抗體進行染色（或按照抗體說明書推薦的量進行）。如果商品化抗體指明實驗次數，也要對標本的細胞濃度進行計數。染色通常室溫30 分鐘或冰上1 小時即可完成，染色體系體積通常在100-500ul，可以適量加入去處非特異性染色的BSA 或其它血清。部分有特殊要求的抗體按照說明書進行染色。避光保存任何加有熒光的樣本可以保護熒光素不被其它因素引起的淬滅。
- 稀釋和過濾：在染色完成后通常加入？PBS 稀釋樣本至500-1000ul 備檢,在上機前最好再行過濾以防部分細胞(如腫瘤細胞，5Y細胞)聚集成團。
- 細胞分選：
- 如果樣本細胞需要分選，保證樣本處理和染色過程在無菌環境進行并盡量低溫保證細胞活性，推薦細胞重懸在培養基/生理鹽水/PBS。
- 盡量濃縮分選的起始樣本，推薦起始樣本體積< 1 ml; 推薦樣本中細胞濃度< 1 X 108/ml。
- 收集分選細胞的試管或多孔板也要無菌，最好使用之前10% 小牛血清封閉4 度過夜，使用前棄去，加入1 ml 培養液待用。
- 細胞分選所需的時間與樣本細胞濃度有關，如果要快速分選，可以減少樣本體積，10μm 以下的小細胞適合更高濃度。
- MoFlo XDP 可提供不同的分選要求組合邏輯來滿足不同的實驗需求。
預約管理規定
- 本單位預約流式細胞實驗的人員，需要提前聯系負責人，進行上機前培訓，培訓合格后方可開通A430房間門禁及儀器預約權限。門禁有效期為半年，半年內未進行任何試驗的人員，取消權限。后續如需要使用，需要聯系管理人員進行復訓。
- 本儀器納入中科院儀器設備共享管理平臺，提供儀器共享和網上實驗預約（http://samp.cas.cn）。請提前兩天預約，目前開放最長2周的預約時限。
- 儀器開放時間為工作日10:00-17:00，由平臺工作人員進行儀器操作。
- 網上預約時，須標注清楚相關信息（示例）：
- 樣品來源：Mouse ES （若是非常規樣本，請告知細胞大小）
- 樣品數量：5
- 激發光：488/561
- 是否為固定樣本：否（若是固定樣本，請預約當天最后一個時間段）
- 后續是否需要培養：分選后的細胞需無菌培養
- 其他需求：需分選至96孔PCR板中，單細胞分選模式。
- 注意：本實驗室不接收感染性樣本（或有潛在感染危險的樣本）的分析分選！
常用耗材推薦：
- 一次性無菌流式管（帶濾膜）：BD falcon（品牌） 352235（貨號）
- 40μm細胞篩：BD falcon（品牌） 352340（貨號）
 
儀器負責人
吳海燕 聯系方式：54921886（辦公室）/54921721（流式實驗室）wuhaiyan@ion.ac.cn
權麗娟 聯系方式：54921886（辦公室）/54921721 （流式實驗室）quanlijuan@ion.ac.cn |
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